Larry Daley (Ben Stiller) é o mais novo guarda noturno do Museu de História Natural. Porém, ele descobre que uma antiga maldição permite que todas as criaturas expostas ganhem vida na calada da noite. Depois de uma noite de muita bagunça e sustos, o rapaz está pronto para abandonar o emprego. Porém, o ex-presidente dos Estados Unidos Theodore Roosevelt (ou melhor, sua réplica) faz com que Larry perceba que sua função é proteger o museu para que nenhuma obra desapareça enquanto está "viva".
